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一个内行人需要了解的细胞爬片知识
点击次数:18 发布时间:2019-10-26
  细胞爬片又名爬片,就是让玻片浸在细胞培养基内,细胞在玻片上生长,主要用于组织学,免疫组织hua学,冰冻切片,细胞涂片,原位杂交等,细胞爬片是根据实验研究的需要,使贴壁细胞在一定的固相表面(如盖玻片、载玻片)上贴壁生长而获得的一种体外细胞实验材料。
 

细胞爬片

  我们在做免疫荧光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡检测(TUNEL)时,免不了要制备细胞爬片,爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。
  在医学生物研究中,免疫荧光检测等需用到细胞爬片。现有的细胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫荧光检测时,为了节约抗体,需免疫组化笔在爬片上进行范围的圈定,将抗体加入划定区域,免疫组化笔中的疏水成分阻滞抗体溢出所圈定的范围,从而达到节约抗体的目的。
  但在实际使用过程中,会有大量免疫组化笔的成分混入目标范围内,且线条粗大,造成样品数量减少,同时混入目标范围内的免疫组化笔的成分容易造成背景噪声及杂质影响免疫荧光的结果,严重影响实验结果的准确。
  爬片的准备:
  1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;
  2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;
  3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后进行高压消毒。
  培养板的准备:
  1、泡酸过夜
  2、冲洗,烘干(1、2步骤与前大致相同)
  3、放入超净工作台用紫外线照1~2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入,若细胞贴壁能力不强,可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话,就可以省略了,进行紫外线消毒)
  注:此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内,紧接着放入培养板内。目的:浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密,以利于细胞长到爬片上。
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