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细胞爬片实验的步骤说明
点击次数:319 发布时间:2018-08-24
   细胞爬片实验的步骤说明
  细胞爬片免疫荧光实验步骤
  第一天:
  1.在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;
  2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次3min;
  3.0.5%Triton X-100(PBS配制)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);
  4.PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;
  5.吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;
  第二天:
  6.加荧光二抗:PBST浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;
  注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
  7.复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;
  8.用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。
  细胞爬片抗原修复液是一种特别适合用于细胞爬片的快速抗原修复液,只需室温孵育5分钟即可完成对细胞爬片样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
  使用说明:1,细胞爬片固定后用PBS洗涤3次,每次5min。2,加入抗原修复液使其覆盖住细胞爬片,室温孵育5min。3,PBS洗涤细胞爬片,重复3次,每次5min。充分洗涤残留的SDS,以免造成抗体失去活性。4,封闭液封闭细胞爬片。5,随后即可进行一抗孵育等后续的免疫染色步骤。
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