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简单介绍下细胞爬片的使用步骤
点击次数:332 发布时间:2018-07-30
   简单介绍下细胞爬片的使用步骤
  细胞爬片步骤
  (1)储存液:1:10稀释液可以保存在4℃里,三个月内仍然可以使用。稀释、储存和吸取多聚赖氨酸要使用塑料制品。
  工作液:0.1%(w/v)PLL,用移液枪吸取0.3ml PLL+3ml无菌去离子水,混匀放于10ml无菌塑料离心管中。封口模密封后4℃存放。
  (2)无菌处理:PLL不可以高温消毒,故应过滤除菌分装于无菌处理的细胞冻存管内,1ml/管,封口模密封,4℃保存。另外,准备无菌去离子水50ml。
  细胞爬片方法与技巧
  爬片的准备:
  1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;
  2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;
  3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就„„)中烘干后进行高压消毒。
  培养板的准备:
  1、泡酸过夜
  2、冲洗,烘干(1、2步骤与前大致相同)
  3、放入超净工作台用紫外线照1~2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入,若细胞贴壁能力不强,可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话,就可以省略了,进行紫外线消毒)
  注:此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内,紧接着放入培养板内。目的:
  浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密,以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候,经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间,爬片上细胞罕见。)
  细胞爬片:
  1、胰酶消化细胞后计数
  2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可
  3、第二天即可进行干预措施
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